VCS-VE101-500 U / 询价
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Vaccinia Capping Enzyme
体外转录的 mRNA 的 5' 端含有三磷酸基团，具有很强的免疫原性，若将其递送至体内，会激活固有免疫应答，RIG-1 会识别三磷酸基团，导致其无法在体内正确翻译出抗原蛋白。因此，在工业生产中需对 mRNA 进行加帽修饰以逃避固有免疫系统。使用酶法进行加帽，首先会使用到 Vaccinia Capping Enzyme，该酶由 D1 和 D12 两个亚基组成，行使三种酶的功能（RNA 三磷酸酯酶、鸟苷酰基转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶），在 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）和鸟苷三磷酸（GTP）的存在下，将 mRNA 修饰成（m7Gppp5'N）Cap0 帽子结构，它对翻译起始因子 eIF4 的招募过程中起着非常重要的作用，而且可有效防止 mRNA 被降解。
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表达系统（Source） |
E.coli |
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储存缓冲液（Storage Buffer） |
20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100, 50% Glycerol, pH 8.0 |
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运输/保存条件（Transportation/ Storage Condition） |
干冰运输，-20 ± 5°C保存，避免反复冻融 |
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酶活定义（Enzyme Activity Definition） |
在 37℃下，1 h 内将 10 pmol [α32P]GTP 掺入 80 个核苷酸（80 nt）转录产物所需的酶量定义为 1 个活力单位（U）。 |
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产品应用（Product Applications） |
体内/体外翻译前 mRNA 的加帽反应；mRNA 的5' 末端标记反应等。 |
| 产品组分 | 产品货号/规格 | |
|---|---|---|
| VCS-VE101-B(500 U) | VCS-VE101-C (5000 U) | |
| Vaccinia Capping Enzyme (10 U/μl) | VCS-VE101-B1(50 μl) | VCS-VE101-C1 (500 μl) |
| 10×Capping Buffer | VCS-VE101-B2(200 μl) | VCS-VE101-C2 (1.5 ml) |
| GTP(10 mM) | VCS-VE101-B3(50 μl) | VCS-VE101-C3(500 μl) |
| SAM(32 mM) | VCS-VE101-B4(50 μl) | VCS-VE101-C4(500 μl) |
（1）用于加帽反应的 RNA 必须经过纯化以及用 RNase-free Water 进行重悬。
（2）反应前热处理 RNA，以去除 5' 末端的二级结构。
（3）针对 5' 末端结构较为复杂的 RNA，可延长反应时间至 60 min，以提高加帽效率。
（4）5' 末端标记反应中，GTP 储液应稀释为反应体系中 mRNA 摩尔浓度的 1 - 3 倍。
（5）本产品仅作科学研究使用，不得用于其它用途。
